光学显微镜观察方法有哪些

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暗场成像下的小水生生物

暗场观察所需要的特殊附件是暗场环和聚光镜,聚光镜的数值孔径至少比所用物镜大0.2才可以实现较好的暗场效果。

暗场成像原理

微分干涉(DIC)成像如果细胞标记了荧光,就不太适合再用相差物镜观察了,因为相差物镜内有相位环,会阻挡部分荧光,此时比较适合的反差增强方法是DIC。DIC可以用高透光的复消色差物镜搭配DIC棱镜和偏光片来实现,拍摄荧光时DIC组件可以从光路中移除,不会对荧光成像产生影响。

DIC呈现出漂亮的3D图像(非真实三维图像),无光晕,分辨率大于相差,适合搭配荧光,但是不适合在塑料器皿中成像。

DIC下的细胞成像

DIC成像时需要在光路中移入4个组件,相对比较复杂,所以一般配在全自动显微镜上,由显微镜自动控制各个组件,以方便使用者操作。并可实现长时间定时拍摄,记录动态过程。

整合调制反差(IMC)成像显微操作时,需要标本呈现出一定的立体效果,DIC虽然有立体效果,但是用DIC时不能用塑料器皿,而显微操作多数都是在塑料器皿里进行的。整合调制反差(IMC)或者霍夫曼反差(HMC)正好满足这个需求。

IMC或者HMC是一种斜照明效果,一侧的狭缝照明造成阴影,产生立体效果。可用于塑料器皿内标本的显微操作。

IMC成像适用于显微操作